蘇州鑑達在哪裡
原創作者：Xiankun Zhao
本文參考：ExPASy Database、ATCC Database、NSTI Database
導讀
● FHC（Fetal Human Colon）細胞株為人正常結腸上皮細胞。它的建立對結腸相關的基礎實驗具有重要意義，尤其在揭示結腸癌病因學研究中，為實驗人員提供了一個合適的體外實驗模型。
（圖片來源：STR profile of FHC， ATCC）
● 目前ExPASy （Cellosaurus）、ATCC均已收錄FHC的標準STR資料。ExPASy與ICLAC雖未將其標註為問題細胞，但鑑達的鑑定結果顯示，FHC細胞株已出現被汙染的情況。
FHC由K。M。 Siddiqui、D。P。 Chopra於1984年建株。細胞株來源於由阿拉巴馬大學醫院提供的合法流產胎兒（孕周大約13-17周）的結腸粘膜組織。
結腸與大腸、迴腸等分離後，將其縱向剝離、用L15培養基進行數次沖洗以去除其他殘留物。結腸粘膜從肌層輕輕刮下，轉移至含0。1%膠原酶但無FBS的培養基中；粘膜切碎後在36。5℃、CO2與空氣比為5%：95%的溼化氣體條件下進行30min孵育；孵育後，對組織進行輕柔搖動、轉移至含0。1%膠原酶的HBSSF培養基中、在磁力攪拌器上36。5℃條件下裂解5min；組織懸浮液600rpm下離心2min；上清液去除、沉澱用含0。1%膠原酶的HBSSF培養基重懸，並繼續裂解15min；細胞懸浮液加入等量的含10%FBS培養基、80x g條件下離心7min；沉澱用含10%FBS培養基重懸；臺盼藍染色排除法計算細胞活力及密度。
將原代FHC細胞分別在35mm、60mm培養皿中進行接種。培養第一週，培養基24h換一次；此後48h換一次。另外，在培養過程中會出現星狀成纖維細胞，需要經常用橡膠刮板將其去除。培養24h後，大部分貼壁細胞會出現獨特形態特徵：總體呈多邊緻密形態、細胞邊緣光滑 、細胞間緊密粘附。PAS染色陽性結果顯示細胞可合成粘多糖。電鏡結果也顯示細胞間的緊密粘附形態，主要透過橋粒、細胞表面的微絨毛建立胞間緻密聯絡。原代培養細胞中也發現了腸道杯狀細胞，除了具有典型的可分泌黏蛋白原的小囊泡，也具有和FHC細胞一樣的橋粒和微絨毛。
（圖片來源：Images of FHC， ATCC）
（圖片來源：K。M。Siddiqui and D。P。 Chopra， 1984）
原代細胞培養2-3周後，收穫具有上皮細胞形態特徵的細胞進行傳代培養，一般接種後24h會再次貼壁。除了具有原代細胞的形態特徵及PAS染色陽性結果，傳代培養細胞還具有胞間指狀突、緻密染色質的鋸齒狀核、濃集趨邊的異染色質。另外，溶酶體及多泡體在傳代培養細胞可以觀察到，但在原代細胞中則不常見到。
細胞生長動力學方面，透過對第13代細胞生長觀測發現，FHC細胞株的倍增時間大約為62h。
（圖片來源：K。M。Siddiqui and D。P。 Chopra， 1984）
鑑達的FHC鑑定
自建株以來，FHC便常被用於各種基礎實驗中，主要集中於結腸癌發生機制、細胞分化調節及細胞凋亡等相關研究。2010年Karel Soucek 等人便發現，FHC細胞有相當數量的染色體異常、TP53基因也存在突變；另外細胞株在體外的半固體培養基上具有錨定非依賴性生長能力，在SCID小鼠體內能夠形成固體瘤。這些獨特的分子生物學方面的特性，讓FHC成為更具價值的實驗模型。
（圖片來源：Karel Souceket al。， 2010）
不過，隨著在各實驗室的培養傳代、實驗，以及實驗室間的購買、交換，FHC細胞株逐漸被其他細胞汙染。與其他被汙染細胞株一樣，2001年之前（STR分型還未逐步被應用到細胞株鑑定工作中）這種情況並未引起各方重視。目前FHC在Cellosaurus、ICLAC中未被標註、登記為問題細胞。但鑑達的FHC鑑定結果顯示，FHC細胞株確實已經出現被汙染的情況。
截止目前，鑑達受理FHC細胞株鑑定共計16株。與ExPASy、DSMZ等資料庫重新比對確認後，實際鑑定結果顯示：有10株為AGS，4株為HELA S3，2株為無匹配結果。鑑達所受理的16株FHC錯誤率達到了100%。
（圖片來源：鑑達的FHC鑑定結果統計）
（圖片來源：鑑達的FHC鑑定報告）
因此鑑達提醒各位老師，應謹慎使用FHC細胞株。若課題實驗必須用FHC，鑑達建議大家，不管何種渠道的細胞株（實驗室已有細胞或新採購買入的細胞）都應及時進行STR鑑定，以確認其身份。
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