pcr技術的引物有幾種
為了擴增基因組中的特定DNA片段，該特定DNA片段的兩側應同時具有正向和反向引物。因此，兩種引物都應該與DNA片段兩側的序列互補。成功設計PCR引物的基本指南如下所述。
正向和反向引物的方向應為 5‘ 至 3’。
每個引物的長度應在18至25個核苷酸之間。
引物的GC含量在40%至60%之間，引物3‘末端存在C或G可以促進結合。
引物對的熔解溫度和Tm（引物的一半退火到模板的溫度）應相似且高於60°C。 最大差值應為5°C。
引物的3’末端應與模板DNA完全匹配。
引物3‘末端的最後5個鹼基中應至少存在2G或C鹼基（GC鉗）。GC鉗促進與靶序列的強結合。
可以將具有5-6個核苷酸的限制性內切位點新增到引物的5’末端。
在引物序列中應避免二核苷酸重複（ATATATAT）或同一核苷酸重複超過4次（ACCCC）。這會導致誤引。
應避免引物內同源性或引物的二級結構。應避免正向和反向引物中的引物間同源性或互補序列。這兩種情況都可能形成自二聚體或引物二聚體。
二聚體分析的ΔG值應在0至-9 kcal/mole之間。
許多線上工具可用於簡化引物設計，例如引物3，引物X，NetPrimer，DNAstrar等。所設計引物的特異性可以透過NCBI引物BLAST或UCSC計算機PCR等工具確定。
圖 1：引物 3 介面