南美對蝦飼料多少錢一噸
本研究的目的是確定，EO（精油）是如何幹擾南美白對蝦中致病性弧菌的QS（群體感應系統）。
對蝦養殖業的增長速度雖然顯著提高，但仍不斷受到由病毒和細菌引起的病原體的攻擊。最近，新出現的弧菌毒株毒性很強，可能導致對蝦發病。大多數弧菌致病菌株對常見的抗生素表現出抗性，使其難以在水產養殖生產系統中控制。在很大程度上，耐藥菌株的出現是由於抗生素的濫用，因為養殖戶常用抗生素來治療弧菌引起的疾病。
一、材料和處理
1、評估細菌菌株、生長條件和精油
①本研究中使用的四種弧菌是哈維氏弧菌（菌株 E22）、坎氏弧菌（菌株LM2013）、副溶血弧菌（菌株 ATCC 27969）和創傷弧菌（菌株S2）。所有菌株均在Luria Bertani瓊脂中培養。
②研究主要評估了五種精油 （EOs），即：有機油（ EOOv ）、互葉白千層精油 （EOma）、檸檬香茅精油 （EOCc）、肉桂精油 （EOCv） 和百里香精油 （EOTv），對於抗QS分析，以及EO被乳化的影響，先前的一些研究已確定用作乳化劑的物質的劑量不會影響評估的引數。另外，確定EO的最低抑菌濃度 （MIC） 和最低殺菌濃度 （MBC） 值，以確定亞致死劑量，僅影響生物發光、生物膜生長和生物發光的QS指標。
③每個微孔板上包括陽性對照（含有細菌但不含E）和陰性對照（含有EO但不含細菌），每種濃度的Eos和對照組各重複6次。
圖1：影響弧菌生長的精油 （A） 哈維氏弧菌、（B） 坎氏弧菌、（C）創傷弧菌和 （D） 副溶血弧菌菌株。所有濃度均針對四種弧菌進行了測試。
2、EOs對生物發光和生物膜形成的影響
評價EO對哈維弧菌、坎氏弧菌、副溶血弧菌和創傷弧菌四種菌株的生物膜的影響。細菌生物膜生物量用紫水晶 （CV） 染色並定量測量。為每種弧菌菌株製備細菌懸浮液。進行包含不含EO的細菌懸浮液的對照，每個濃度重複六次。去除浮游生物細胞並仔細清洗產生的生物膜兩次。然後洗滌板以去除多餘的染料並在室溫下乾燥。
3、EO對流動性的影響
還評估了EO對四種弧菌移動性的影響。對另外的LBb進行高壓滅菌。將培養基LB冷卻至45±30°C後，將EOs分別新增到待評價的每個濃度中。將LB培養基倒入培養皿中，將板乾燥15分鐘，然後在板之間接種弧菌。
將板在26攝氏度下孵育 72 小時，並以mm為單位測量細菌遷移。將用EOs處理的細菌的運動與未處理的細菌的運動進行比較。
4、EO的體外和體內毒性
為了確定EO在體內的安全性，在商業孵化場提供的三種南美白對蝦蝦苗，即：Zoea 1 （Z-1）、Mysis 1 （糠蝦，M-1） 和蝦苗 （PL）。每個測試都是獨立進行的。測試中使用的水在高壓滅菌器中過濾和消毒。EO精油在8小時後應用到每個實驗單元的總含水量中，對照組是未暴露於EO的蝦苗。監測蝦苗96小時。將資料轉換為存活百分比，將100%視為未接受EO的蝦苗的存活率。此外，獲得的資料確定了每個階段的致死劑量為 50% （LD50）。
5、EOs的體內抗病毒作用和EOs在南美白對蝦養成池中的應用效果
在此階段，使用健康的南美白對蝦蝦進行的試驗驗證了EO的抗菌功效。製備細菌接種物，作為對照，進行不含EO的坎氏弧菌培養。
每日飼餵量最初設定為蝦平均體重的約3%，並根據飼料消耗量和觀察到的生長速率每週調整。在收穫時評估最終蝦存活率 （%）、平均體重 （g）、產量 （kg/ha） 和飼料轉化率 （FCR）。
二、研究成果
1、確定EO的亞致死劑量和生物發光抑制
與評估的四種弧菌菌株相比，EOs表現出不同的MIC和MB 值。EOOv和Eoma的MIC和MBC值最低，表明它們的抑制和殺菌活性強於其他的精油。
結果表明，在測試的最高濃度下，沒有EO影響四種致病性弧菌的生長。只有EOOv和Eoma顯著降低了哈維氏弧菌和坎氏弧菌的生物發光。
對於EOOv和Eoma，每個細菌系中的生物發光抑制百分比顯示出明顯的濃度依賴性。EOOv是抑制生物發光最有效的精油。
2、EOs影響生物膜形成和細菌遷移
EOCc、EOCv和EOTv不抑制所評估的四種致病性弧菌中的生物膜形成，因此，在運動性測定和體內測定中沒有進一步考慮它們。
EOOv和 Eoma顯著降低了四種弧菌的生物膜濃度依賴性。
EOOv是在每種情況下將四種病原菌的生物膜減少50%以上的最有效的精油。
與EO相比，抗生素土黴素對弧菌生物膜形成的抑制效果較差，尤其是在副溶血性弧菌中。四種致病性弧菌的流動性受EO濃度的影響。
圖2：精油和土黴素對弧菌菌株的影響。
對於土黴素運動性測試，我們選擇了創傷弧菌菌株，因為它能夠遷移以覆蓋整個培養皿96小時。在這項研究中，我們發現EO也會影響抗生素耐藥性。由於EOs降低了創傷弧菌的運動性，因此在EOs存在下的土黴素環一直保持到96小時實驗結束。在對照組中，無菌環境隨時間減少。
圖3：在抗生素土黴素存在的情況下，精油具有減少創傷弧菌蠕動的作用。
3、EOs的體外和體內毒性，以及EOs在南美白對蝦養成池中的有益作用
EOs的體內毒性試驗表明，蝦苗越早，它們對EOs的敏感性就越大。在Zoea階段，兩種EO嚴重影響了大多數評估劑量的存活率。關於Mysis（糠蝦）階段，EOs僅在評估的最高劑量下對生存產生負面影響。
對於蝦苗階段 （PL），EOOv僅在10。0 μgmL-1濃度下降低存活率，任何濃度下的EOMa不影響蝦苗的存活率。
在有和沒有EO的情況下，觀察到南美白對蝦的累積死亡率之間存在顯著差異。對於對照組，在兩種評估劑量下用EOOv處理的池塘中，累積存活率和產量均顯著提高 。對於Eoma，僅在最高劑量 （5。0 mg kg-1） 下存活率和產量顯著高於對照組。
三、研究結論
研究表明，EOOv和Eoma作為飼料在蝦池中使用時，取得了令人鼓舞的結果；哈維氏弧菌和坎氏弧菌的生物發光抑制；防止四種弧菌中的生物膜形成；在養成池中獲得更高的存活率和產量。因此，EOOv和Eoma可以抑制與蝦養殖相關的四種致病弧菌中QS的過程。
體外試驗的觀察結果可以確定體內試驗的活性成分劑量，其中EOOv和EOMa顯著提高了用坎氏弧菌試驗的蝦的存活率。
EOs即使在抗生素土黴素存在下也能抑制弧菌運動的能力，結果表明應用EOs，增加抗生素的有效性。在這項研究中，EOOv在所評估的四種弧菌中抑制QS的過程最有效。