如何取骨髓
間充質幹細胞因其獨特的生物特性，使其成為幹細胞移植或組織再生領域的理想種子細胞。近年來幹細胞產業蓬勃發展，而以間充質幹細胞為基礎的臨床前研究正緊鑼密鼓地開展，尤其是骨髓間充質幹細胞，因此本文介紹如何高效地從骨髓中分離培養得到間充質幹細胞。
大鼠骨髓來源的間充質幹細胞形態圖
1。 實驗準備
實驗所需4%水合氯醛，成年SD大鼠，剪刀鑷子等，冷的消毒酒精，完全培養基，冰袋，培養瓶等細胞培養耗材等。
2。 取股骨和脛骨
大鼠麻醉後，頸椎脫臼處死，酒精表面在大鼠身體消毒。剪刀剪去毛髮，剪開後肢面板和肌肉，連帶肌肉和股骨脛骨一起分離，放入冷的消毒酒精中，轉移到超淨臺進行肌肉分離。在剪下股骨脛骨時應在關節處剪斷，不要將骨頭破壞，以免汙染。鑷子配合眼科剪進行肌肉分離，肌肉分離過程儘量迅速，並在冰上操作。分離的股骨和脛骨放入冷的PBS液中，剪刀剪斷股骨脛骨兩頭，暴露骨髓腔。放入完全培養基中。
3。 骨髓分離和細胞接種
5毫升注射器吹吸骨髓腔，反覆吹吸3-5次，直到骨髓腔發白為止，此時換用移液管繼續吹打，直到培養基中骨髓完全吹散位置。70微米細胞篩網過濾碎渣，接種到培養瓶中培養。基本上這時大部分可見的都是血細胞，也可以在分離後用紅細胞裂解液處理。也可以直接懸液接種，但是隔天要換液以除去血細胞，換液過程要輕柔，否則震盪會使皿底的間充質幹細胞混懸到血細胞中。換液2-3次後，血細胞基本就沒有了，剩餘的貼壁細胞大部分就是間充質幹細胞。一般情況下3-5天就可以在顯微鏡下觀察到有長梭形細胞爬出，當然也會有少量的免疫細胞，如不成熟的樹突狀細胞等。這些細胞會隨著細胞培養程序慢慢被淘汰，可能是細胞生長的環境不利於這些免疫細胞存活，也可能是換液被換走了。
按照全骨髓法培養的間充質幹細胞傳代到第三代左右，細胞純度就比較高了，可以進行相應的細胞成骨成脂分化鑑定，細胞表面分子流式或者免疫熒光鑑定。